使用酶標儀測定黃曲霉毒素，常采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法，以下是具體的操作步驟：

        樣品準備：稱取一定量的食用油或其他含油食品樣品，用適當?shù)奶崛∪軇ㄈ缂状?- 水混合溶液，常見比例為 7:3）進行提取。將樣品充分振蕩、離心，使黃曲霉毒素溶解在提取液中。然后取一定量的上清液，根據(jù)需要進行適當稀釋，以確保后續(xù)檢測時樣品中黃曲霉毒素的濃度在標準曲線范圍內(nèi)。

        試劑準備：準備黃曲霉毒素 ELISA 檢測試劑盒，該試劑盒通常包含包被有黃曲霉毒素抗原的微孔板、黃曲霉毒素標準品（不同濃度梯度，如 0、5、10、20、50、100 ng/mL 等）、酶標記物（一般是酶標記的抗黃曲霉毒素抗體）、洗滌液、底物溶液和終止液等。

        加樣：在微孔板中加入不同濃度的黃曲霉毒素標準品，每個濃度設置至少 2 個平行孔，作為標準曲線的參考點。同時，加入適量的處理好的樣品溶液到相應的孔中，同樣設置平行孔。另外，還需設置空白對照孔（通常加入等量的提取溶劑或稀釋液）和陰性對照孔（加入已知不含黃曲霉毒素的樣品提取液）。

        溫育反應：將微孔板放入恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜的溫度（如 37℃）下溫育一定時間（如 30 分鐘至 1 小時），使樣品中的黃曲霉毒素與包被在微孔板上的抗原充分競爭結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點。

        洗滌：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌微孔板，一般洗滌 3-5 次，每次浸泡 1-2 分鐘，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性吸附帶來的干擾。

        加酶標記物：向每個孔中加入適量的酶標記物，使酶標記的抗黃曲霉毒素抗體與結(jié)合在微孔板上的黃曲霉毒素發(fā)生特異性結(jié)合。然后再次將微孔板放入恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜溫度下溫育一定時間（如 30 分鐘左右）。

        洗滌：重復上述洗滌步驟，徹底洗去未結(jié)合的酶標記物。

        加底物顯色：向每個孔中加入適量的底物溶液，酶標記物中的酶會催化底物發(fā)生顯色反應，產(chǎn)生有色物質(zhì)。在適宜溫度下避光反應一定時間（如 15-30 分鐘），使顏色充分發(fā)展。

        終止反應：加入終止液，終止酶促反應，使顏色穩(wěn)定下來。此時，溶液的顏色深淺與樣品中黃曲霉毒素的含量呈負相關，即樣品中黃曲霉毒素含量越高，與包被抗原結(jié)合的抗體就越少，酶標記物結(jié)合的量也越少，顯色反應就越弱，顏色越淺。

        測定吸光度：將微孔板放入酶標儀中，選擇合適的波長（一般為 450 nm），測定每個孔的吸光度（OD 值）。

        繪制標準曲線和計算結(jié)果：以黃曲霉毒素標準品的濃度為橫坐標，對應的平均 OD 值為縱坐標，繪制標準曲線。根據(jù)樣品孔的平均 OD 值，從標準曲線上查得對應的黃曲霉毒素濃度，再根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)和稱樣量，計算出樣品中黃曲霉毒素的實際含量。

        通過以上步驟，利用酶標儀結(jié)合 ELISA 法可以準確測定食品中黃曲霉毒素的含量。

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